本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白 5（IGFBP-5）濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于骨代謝、細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合、IGF 生物利用度及組織修復(fù)研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 |
大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白5elisa試劑盒 | 英文名稱 | IGFBP-5 ELISA Kit |
貨號 | CS-5289E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗 |
核心原理：
固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 IGFBP-5 抗體。
結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，IGFBP-5 被固相抗體捕獲。
檢測：加入化的抗大鼠 IGFBP-5 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類型與處理
?血清?：使用無熱原/內(nèi)毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。
?細(xì)胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。
?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。
2. 注意事項
樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。
細(xì)胞培養(yǎng)上清可能因細(xì)胞狀態(tài)等因素導(dǎo)致檢測波動，建議設(shè)復(fù)孔。
操作步驟：
1.加樣孵育
每孔精準(zhǔn)加入 100μL 對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 / 待測樣本，空白孔加等量樣本稀釋液；貼封板膜密封微孔板，置于 37℃恒溫孵育箱，避光孵育 90min，保證抗原抗體充分結(jié)合。
2.洗板
輕柔棄去孔內(nèi)液體，吸水紙上快速拍干；每孔加滿洗滌工作液，靜置浸泡 30s，甩干拍凈；重復(fù)洗滌5 次，去除未結(jié)合雜質(zhì)，降低背景值。
3.加酶結(jié)合物孵育
除空白孔外，每孔加入 100μL HRP 標(biāo)記特異性檢測抗體；輕微水平晃板混勻，重新封板，37℃避光恒溫孵育 60min。
4.二次洗板
重復(fù)上述洗板操作 5 次，嚴(yán)格拍干孔內(nèi)殘留液體，杜絕殘留洗液造成假陽性、數(shù)據(jù)偏差。
5.底物顯色
避光條件下，每孔加入 90μL TMB 底物顯色液，輕柔混勻；37℃避光精準(zhǔn)孵育 10~15min，此時液體逐步顯現(xiàn)藍(lán)色，顯色深淺與待測物含量正相關(guān)。
6.反應(yīng)終止
嚴(yán)格遵循加樣順序，每孔快速加入 50μL 酸性終止液，輕晃微孔板充分混勻，藍(lán)色即刻轉(zhuǎn)為黃色，終止酶促顯色反應(yīng)。
7.上機(jī)讀數(shù)檢測
加終止液后15min 內(nèi)，用酶標(biāo)儀測定各孔 450nm 波長吸光度（OD 值）；以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD 值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合方程計算待測樣本目標(biāo)蛋白濃度。
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