產(chǎn)品簡介:

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的骨成型蛋白 4(BMP-4)蛋白濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL,靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL,適用于骨發(fā)育、胚胎發(fā)育、軟骨形成及組織修復(fù)研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱:大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)elisa試劑盒
英文名稱:BMP-4 ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)品貨號:CS-5872E
檢測原理:

大鼠骨成型蛋白 4 (BMP-4) ELISA 試劑盒的原理是?雙抗體夾心法?,通過固相載體捕獲抗原,再用酶標(biāo)記的檢測抗體進(jìn)行識別,最后通過底物顯色反應(yīng)來定量檢測。
?固相化?:微孔板預(yù)先包被抗大鼠 BMP-4 抗體。
?結(jié)合?:加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本,BMP-4 被固相抗體捕獲。
?檢測?:加入生物su化的抗大鼠 BMP-4 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素,形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
?顯色?:加入 TMB 底物,被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
?測定?:用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值),濃度與 OD 值成正比。
實驗步驟?:

?試劑準(zhǔn)備?:將試劑盒平衡至室溫(20-25℃),洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?:每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本,37℃孵育90分鐘。
?洗滌?:棄去液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后甩干,重復(fù)5次。
?加檢測抗體?:每孔加入100μL檢測抗體-HRP,37℃孵育60分鐘。
?洗滌?:同步驟3。
?顯色?:每孔加入90μL TMB底物A+B混合液,37℃避光孵育15分鐘。
?終止?:每孔加入50μL終止液,立即搖勻(顏色由藍(lán)變黃)。
?檢測?:450nm波長測定吸光度(OD值),15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?:

1.試劑提前室溫平衡 30 min,濃縮洗滌液按說明書稀釋配制。
2.設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔,精準(zhǔn)加樣后封板。
3.37℃恒溫孵育結(jié)合反應(yīng),結(jié)束后棄孔內(nèi)液體拍干。
4.加滿洗滌液浸泡清洗,重復(fù)洗板 3–5 次,去除未結(jié)合雜質(zhì)。
5.除空白孔外,每孔加入 HRP 酶結(jié)合物,再次 37℃溫育。
6.重復(fù)洗板流程洗凈游離酶標(biāo)抗體,保證背景干凈。
7.依次加入顯色液避光顯色,待梯度藍(lán)色清晰顯現(xiàn)。
8.加入終止液終止反應(yīng),顏色由藍(lán)轉(zhuǎn)黃,即刻用酶標(biāo)儀讀取 OD 值。
9.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合計算,得出樣本目標(biāo)物質(zhì)濃度。