實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內(nèi)院校的細胞生物學研究，作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
黃牛皮膚細胞；BTA-S2 | 貼壁生長 | EY-X63783 |
?
細胞名稱 黃牛皮膚細胞；BTA-S2
形態(tài)特性: 成纖維細胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細胞系來源于一雄性黃牛的皮膚組織。2004年由中國科學院昆明細胞庫建立。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%NBS
傳代方法: 1：2傳代；3-4天一次
傳代情況: P2
凍存條件: 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 熒光法（-）
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來，吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液，吹打下細胞，即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細胞，盡量去除細胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞，即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
M3抗體檢測試劑盒細胞名稱: 人臍靜脈內(nèi)皮細胞；HUV-EC形態(tài)特性: 上皮細胞樣Ganglioside M3 antibody
腎上腺素能a1A受體檢測試劑盒細胞名稱: 人慢性髓系白血病細胞；K562形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣；圓形adrenergic alpha-1A receptor
腎上腺髓質(zhì)素原檢測試劑盒細胞名稱: IL-2依賴的人淋巴T細胞系；Kit225－k6形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣pro-adrenomedullin
腎小球足細胞裂隙膜蛋白檢測試劑盒細胞名稱: 人導管瘤細胞；BT-474形態(tài)特性: 上皮樣；圓形、成團Podocin
生長分化因子3檢測試劑盒細胞名稱: 黑人Burkitt淋巴瘤細胞；Raji形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣growth differentiation factor 3
生長分化因子5檢測試劑盒細胞名稱: 人急性髓性白血病細胞；KG-1a形態(tài)特性: 骨髓瘤細胞樣growth differentiation factor 5
生長激素促分泌素受體內(nèi)源性配體檢測試劑盒細胞名稱: 人結(jié)直腸癌細胞；DiFi形態(tài)特性: 上皮樣ghrelin
生長抑制DNA損傷基因檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠纖維肉瘤細胞；WEHI-13VAR形態(tài)特性: 成纖維細胞樣PPP1R15A;GADD34
視錐蛋白樣蛋白1檢測試劑盒細胞名稱: 人T淋巴細胞白血病細胞；C8166形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Visinin Like Protein 1
嗜環(huán)蛋白;親環(huán)素B檢測試劑盒細胞名稱: 人T淋巴瘤細胞；HUT102形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣cyclophilin B
嗜細胞活化趨化因子3檢測試劑盒細胞名稱: 人B淋巴細胞；WIL2-S[WIL2S]形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Eotaxin-3;CCL26
嗜異性抗體檢測試劑盒細胞名稱: 敘利亞倉鼠腎細胞；BHK-21形態(tài)特性: 成纖維細胞樣Forssman antibody
受體TNFRSF結(jié)合絲氨蘇氨激酶2檢測試劑盒細胞名稱: 抗肺炎支原體單克隆抗雜交瘤細胞株；MP-H5形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣receptor TNFRSF-interacting serine-threonine kinase 2
舒*檢測試劑盒細胞名稱: 抗副甲型沙門氏菌單克隆抗體雜交瘤細胞株；PaSh-D3D7形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣*
衰老關鍵蛋白1檢測試劑盒細胞名稱: 抗單克隆抗體雜交瘤細胞株；PenS-4C1形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Fibulin 1
雙糖鏈蛋白聚糖檢測試劑盒細胞名稱: 抗克羅特羅素單克隆抗體雜交瘤細胞株；CL形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣biglycan
水通道蛋白4抗體檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠胚胎成纖維細胞；NIH/3T3形態(tài)特性: 成纖維細胞樣Aquaporin 4 antibody
黃牛皮膚細胞；BTA-S2心浸液瓊脂規(guī)格：250g用途：用于培養(yǎng)營養(yǎng)要求高的微生物
藥敏紙片規(guī)格：5μg/片，20片/瓶用途：抗菌藥體外敏感試驗。
胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）（ISO9038-1-2000）規(guī)格：250g用途：用于大腸桿菌培養(yǎng)
血液增菌培養(yǎng)基規(guī)格：BR250g詳情介紹
含糖牛肉湯培養(yǎng)基規(guī)格：250g用途：用于乳菌培養(yǎng)
GVPC瓊脂基礎添加劑規(guī)格：5支/套用途：每套添加于100mlGVPC瓊脂中
點擊放大
