細(xì)胞名稱 胚肺二倍體細(xì)胞；KMB-17
形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 來自于4周齡女孩胚胎，1975年中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院昆明醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所建立；可作為轉(zhuǎn)染宿主，用于肺損傷或分化的研究。
培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)新生牛血清，10%；水解乳蛋白，10%
傳代方法: 1：2-1：4
傳代情況: P10
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 培養(yǎng)法（-）
公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
胚肺二倍體細(xì)胞；KMB-17 | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63452 |
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冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
rrCXCL3/CINC-2b, CF (25 UG)細(xì)胞名稱: 貓腎細(xì)胞；CRFK MEM-
酚紅Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)甲基三丁基化銨
環(huán)貝特CD44 (156-3C11) Mouse mAb (Biotinylad)2-溴酰溴
曙紅Y(水溶)TCL1 Antibody2-溴吡
偶氮胭脂紅BBAP31 Antibody2-二環(huán)己基-2,4,6-三異基聯(lián)
偶氮胭脂紅GHEF1/NEDD9 (2G9) Mouse mAb2-二-叔丁膦基-2',4',6'-三異基聯(lián)
熒光桃紅B,酸性紅92GCN2 (E9H6C) Rabbit mAbBoc-L-beta-高
依萊鉻紅BWWOX Antibody奎尼丁
固紅RLWWOX Antibody基磺酰
固紅紫色LB鹽hnRNP A0 Antibody2-溴代異戊酸
莧菜紅ACSL1 Antibody(S)-(-)-2-甘氨
麗春紅4R,新胭脂紅,亮麗春紅5R,酸性紅18M-Cadherin (D4B9L) Rabbit mAb5-氨基-2-溴嘧啶
酚藏花紅M-Cadherin (D4B9L) Rabbit mAb2-芐基酸
天狼星玫紅，BBTHEX1 Antibody對(duì)甲氧基基酚
釕紅Tris-Glycine SDS Running Buffer (10X) 5-氨基-2-氟甲酸
藻紅B,四熒光素Phospho-Akt (Ser473) (587F11) Mouse mAb沒有中文名
酸性紅88 Phospho-Akt (Ser473) (587F11) Mouse mAb氟-2-
酸性紅183THEX1 (D2B4) Rabbit mAb(S)-羥基丁酸酯
酸性紅9PKM2 (D78A4) XP® Rabbit mAbL-谷氨酰
孔雀石綠PKM2 (D78A4) XP® Rabbit mAbL-賴氨酸
燦爛綠,亮綠Phospho-Drosophila Akt (Ser505) Antibody6-甲氧基-2,3,4,5-四氫吡啶
甲基綠THEX1 (D66A11) Rabbit mAb2,二-5-甲基吡啶
茜素綠;酸性綠25Phospho-Akt (Thr308) (244F9) Rabbit mAb(R)-縮水甘油
萘酚綠BPhospho-Akt (Thr308) (244F9) Rabbit mAb氧甲酰基亞基三基膦
固綠FCFPhospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAb甲酸
子種綠A；藍(lán)APhospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAb2-甲氧基基酸
亮綠SF(淡黃)Phospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAb甲氧基酸
健那綠BAkt3 Antibody2,3,4,6-四酰氧基-alpha-D-吡喃葡萄糖溴化物
酸性綠3CNOT3 (D4K4N) Rabbit mAb1-叔丁氧羰基哌
酸性綠 50 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb-2-吡啶甲酸
酸性綠APhospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb2-溴蒽醌
Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAbN-BOC-GAMMA-氨基丁酸
靛藍(lán)N-Cadherin Antibody9-溴菲
甲基藍(lán)CD6 (E9Y7Y) Rabbit mAb戊鈉
伊文思藍(lán)；埃文斯藍(lán)MST3b Antibody2-氨基--6-甲氧基嘧啶
曲利藍(lán)LSD1 (1B2E5) Mouse mAb5--2-氟
維多利亞藍(lán)B,性藍(lán) 26CXXC1 (D1R5R) Rabbit mAb2-溴-5-氟
胚肺二倍體細(xì)胞；KMB-17人5核苷酶(5-NT)ELISA試劑盒LHELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人腺嘌呤二核苷磷(NADPH)ELISA試劑盒LHELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人L丙氨解氨酶(PAL)ELISA試劑盒LHRHELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA試劑盒LHRHELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA試劑盒LHRHELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人α2纖溶酶抑制物(α2-PI)ELISA試劑盒LIFELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人αL艾杜糖苷酶(IDUA)ELISA試劑盒LIFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA試劑盒LIFELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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