細(xì)胞名稱 乳腺癌細(xì)胞；MCF7B
形態(tài)特性: 上皮樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細(xì)胞為MCF-7細(xì)胞的一個亞，表達(dá)高水平的褪黑素MT1受體的mRNA，對褪黑素有一定的敏感性。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代；3~4天1次。
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法（-）
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產(chǎn)品名稱 | 乳腺癌細(xì)胞；MCF7B |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號 | EY-X63241 |
產(chǎn)品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞，以0.25％消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。
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RANK Ligand (L300) Antibody間二酚
奧美沙坦SP Antibody交酯
1,二氨基胍鹽酸鹽 GSK-3α (D80D1) XP® Rabbit mAb側(cè)鏈
3,5-二-L-甲狀腺素,3,5-二甲腺原氨酸GABA(B)R2 (C44A4) Rabbit mAb(4R,5S,6S)-[[(3S,5S)-5-[(二甲基氨基)甲酰基-1-[[(硝基芐基)氧]羰基]-吡咯烷基]硫]-6-[(1R)-1-羥基]-甲基-7-氧代-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2--2-羧酸 硝基芐基酯
短葉松素(標(biāo)準(zhǔn)品)CREB (D76D11) Rabbit mAb
D Akt (pan) (40D4) Mouse mAb (Biotinylad)甲基酸酯
帕比司他CDC20 Antibody2-氨基-1-丁
HDAC靶點抑制劑Cardiogenesis Marker Antibody Sampler Kit戊酮
鹽酸洛美利PAK2 (3B5) Mouse mAb酸甲酯
酯蟾毒配基；蟾力蘇(標(biāo)準(zhǔn)品)MacroH2A1.2 Antibody吡咯烷酮
蒲公英甾(標(biāo)準(zhǔn)品) NKCC1 Antibody2-溴-吡啶
TAK875SimpleChIP® NR4A3 Promor Primers2-噻吩
Calmodulin Antibody2-氨基噻唑
(標(biāo)準(zhǔn)品)APS Antibody5--2-氟甲
華蟾毒它靈;華蟾素(標(biāo)準(zhǔn)品)HAUSP (D17C6) XP® Rabbit mAb2-巰基噻唑啉
維甲酰酚HAUSP (D17C6) XP® Rabbit mAbN-甲基吡咯
2-氨基嘌呤,異腺嘌呤;異腺素;2-APPhospho-c-Kit (Tyr568/570) Antibody糖酸
3,5-二羥基甲MARK4 Antibody5-硝基水楊酸
遠(yuǎn)華蟾蜍精(標(biāo)準(zhǔn)品)PHD-2/Egln1 (D31E11) Rabbit mAb-甲酸
日小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；BALB/3T3cloneA31形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞生長特性: 貼壁生長Human Angiopoietin-1 ELISA KIT
小鼠巨噬細(xì)胞；Ana-1形態(tài)特性: 生長特性: 懸浮生長Human LIMPII ELISA KIT
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小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；NIH/3T3形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞生長特性: 貼壁生長Mouse CTACK ELISA KIT
小鼠SRSV轉(zhuǎn)化的3T3細(xì)胞；SRSV/3T3形態(tài)特性: 圓形生長特性: 貼壁生長Mouse Osteoprotegerin ELISA KIT
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小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；3T3-Swissalbino形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞生長特性: 貼壁生長Human HSP27 ELISA KIT
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小鼠A(CsA)ELISA試劑盒ANG-ⅡELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA試劑盒ANG-ⅡELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠內(nèi)素(ET)ELISA試劑盒ANG-ⅡELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠Ⅱ(FⅡ)ELISA試劑盒ANG-ⅡELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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