1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
商品描述：
產品名稱 | RPMI-1640 無糖培養基 | 規格 | 500ml |
用途 | 僅供科研研究實驗 | 貨號 | EY-XP4265 |
產品介紹
RMPI 1640培養液是由Moor等研究成功的，最初為培養小鼠白血病細胞的需要而準備。開始的配方特別適合懸浮細胞的生長，主要針對淋巴細胞，后經多次改良從RPMI 1630、1634，而至RMPI 1640。其組成較為簡單，但可以適應很多種類細胞的生長。不僅腫瘤細胞，而且很多正常組織細胞可用RMPI 1640進行體外培養。實驗室一般將RMPI 1640作為實驗和細胞維持的基本培養液，目前RMPI 1640是應用最為廣泛的培養基之一。本培養基為無添加葡萄糖RMPI 1640基礎培養基。
培養基主要成份表
（+） 酚 紅
（+） L-谷氨酰an
（--） HEPES
（--） D-葡萄糖
運輸和保存
放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸（儲存條件2-8℃ 避光儲存）產品保質期12個月。
注意事項：
僅限科研用。
培養體系中的一些組分是對人體健康有害的物質，請不要用暴露的皮膚接觸培養體系的液體和有培養體系的液體殘留的容器內部；這部分有害物質的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。
細胞培養步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備DMEM-H培養基(添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據實驗需要選擇懸浮培養基，使293T細胞懸浮生長。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
公司正在出售的產品：
小鼠原B細胞株 | 小鼠原代胸腺上皮細胞專用培養基 |
人肺腺癌耐藥性細胞 | 兔原代卵巢內膜細胞專用培養基 |
人胃癌細胞-熒光標記 | 兔原代胸主動脈平滑肌細胞專用培養基 |
人胰腺癌細胞-熒光標記 | 兔原代星形膠質細胞專用培養基 |
人乳腺癌細胞-紅色標記 | 兔原代尾尖成纖維細胞專用培養基 |
人鼻咽癌細胞-熒光標記 | 兔原代胰腺星狀細胞專用培養基 |
人乳腺癌細胞-綠色標記 | 人原代結腸成纖維細胞專用培養基 |
小鼠皮膚黑色瘤細胞-紅色標記 | 大鼠原代卵巢內膜細胞專用培養基 |
小鼠乳腺癌細胞-熒光標記 | 兔原代牙髓干細胞專用培養基 |
人皮膚黑色瘤細胞熒光標記 | 兔原代小腸隱窩上皮細胞專用培養基 |
Cas9穩定表達的人宮頸癌細胞；Hela-Cas9-533 | 大鼠原代胸腺基質細胞專用培養基 |
人腎細胞腺癌細胞-熒光標記 | 兔原代前脂肪細胞專用培養基 |
人子宮內膜癌細胞-熒光標記 | 大鼠原代腎集合管上皮細胞專用培養基 |
人慢性髓原白血病細胞-熒光標記 | RPMI-1640 無糖培養基小鼠原代皮膚成纖維細胞專用培養基 |
小鼠肺癌細胞-熒光標記 | 大鼠原代椎體終板軟骨干細胞專用培養基 |
點擊放大
